应用简介
SnapGene6破解版是一款非常优秀的分子生物学软件。该软件为用户提供了可视化、模拟、避免错误、自动记录、拥有您的数据、转换文件格式等不同的优势，新的版本中增加了新功能和显示选项，非常适合一些专业的人员来使用！
【功能特点】
一、想象
1、DNA可视化
查看DNA序列的多个视图。
地图 · 序列 · 酶 · 特征 · 引物 · 历史
自定义酶位点，特征，引物，ORF，DNA颜色等的显示。地图可以是圆形或线性格式。
使用双链模式查看酶位点，具有翻译，引物和DNA颜色的特征。单链模式显示具有彩色特征的紧凑概览。
从一系列酶组中选择。剪切网站可以显示为数字或行，按名称或频率排序。
按名称，位置，大小，颜色，方向性或类型对带注释的要素列表进行排序。复选框在紧凑或完全展开的显示之间切换。
按名称，长度，颜色，结合位点，方向性或解链温度对杂交引物列表进行排序。复选框在紧凑或完全展开的显示之间切换。
查看DNA构建体的自动生成的图形历史记录。祖先序列可以作为单独的文件恢复
2、大序列支持
浏览染色体大小序列。
查看 · 搜索 · 缩放
利用SnapGene的高效数据处理功能，扫描具有数千种注释功能的大型DNA序列。
使用专有的MICA算法立即在染色体内找到序列。
使用多功能控件调整缩放系数和显示区域。
3、蛋白质可视化
查看蛋白质序列的多个视图。
地图 · 序列 · 属性 · 特征 · 历史
自定义区域，站点，键和序列颜色的显示。
使用具有相关特征的1-或3个字母的氨基酸代码查看蛋白质序列。
查看蛋白质的分子量，消光系数，等电点和氨基酸组成。可以对蛋白质的选定部分进行相同的分析。
按名称，位置，大小，颜色或类型对带注释的功能列表进行排序。复选框在紧凑或完全展开的显示之间切换。
查看自动生成的蛋白质序列图形历史记录。祖先蛋白质或DNA序列可以作为单独的文件再生。
4、直观的序列编辑
轻松编辑DNA和蛋白质序列。
标准编辑 · DNA结束
进行插入，删除，替换和大小写更改。复制并粘贴序列时，会自动传输功能。
编辑线性DNA序列的末端以添加或去除突出端或磷酸酯。
5、序列颜色编码
将选定的DNA或氨基酸序列设置为十种颜色之一。
给两条DNA链或蛋白质序列着色。颜色在Map和Sequence视图中都可见。
6、特征注释
自动注释常用功能，或手动注释新功能。
自动特征检测 · 手动特征注释
使用SnapGene广泛的数据库查找DNA序列中的常见特征。您选择的其他功能可以添加到自定义数据库中。
选择DNA或蛋白质序列的一部分，并使用灵活的GenBank兼容控件注释特征。
二、模拟
1、限制性站点指标
确认限制性网站适合克隆。
独特性 · 甲基化敏感性 · 特殊性质
以粗体显示独特的限制性位点，或选择自动定义的Unique Cutters或Unique 6+ Cutters酶组。
不要被愚弄，因为限制性位点被Dam，Dcm或EcoKI甲基化阻断。SnapGene将自动用星号标记该站点。
利用工具提示来避免有问题的限制网站。
2、限制性克隆
可视化克隆过程的所有方面。
如果您已经考虑过程，则模拟只需几秒钟。如果克隆过程存在设计缺陷，则可以捕获并纠正错误。
3、PCR
模拟标准PCR。
使用您自己的引物，或要求SnapGene自动设计引物。产品文件在其历史记录中存储模板和引物。
4、重叠延伸PCR
通过重叠延伸PCR融合片段
最多可组装八个碎片。选择要连接的片段及其方向，SnapGene将设计引物。
5、引物定向诱变
使用诱变引物进行定点诱变。
选择诱变引物，按下按钮查看修饰的质粒。历史颜色突出了突变。
6、网关®克隆
模拟网关® BP克隆或LR克隆，或两者在同一时间。
为方便起见，提供了常见的供体向量和目的向量。选择要组装的片段，SnapGene将设计引物。
7、吉布森大会®
通过融合多达八个片段或通过将多达八个片段插入向量来模拟Gibson Assembly。Gibson Assembly是一种流行的无缝克隆方法。
选择要融合的片段及其方向，SnapGene将设计引物。线性化的载体可以通过酶消化或反向PCR产生。
8、IN-FUSION ®克隆
通过在向量中插入最多八个片段来模拟Clontech的In-Fusion克隆。In-Fusion克隆是一种非常通用的方法，可用于创建无缝基因融合。
选择要融合的片段及其方向，SnapGene将设计引物。线性化的载体可以通过酶消化或反向PCR产生。
9、TA和GC克隆
通过TA或GC克隆捕获PCR产物。
选择传统的TA克隆或高效GC克隆。
为方便起见，提供了常见的TA克隆载体和Lucigen的GC克隆载体。
10、退火Oligos
退火两个寡核苷酸形成双链产物。
使用简单的控件添加突出限制克隆。
【破解说明】
把crack中的SnapGene.exe复制到安装目录中，默认C：\ Program Files（x86）\ SnapGene，点击替换目标中的文件
【使用教程】
限制性克隆的技巧
对于许多应用，常规限制性克隆仍然是最好的方法。一些简单的技巧将有助于确保您的克隆顺利进行。
1、一般技巧
首先，在程序的每一步都要小心。从长远来看，这种方法可以节省时间。
确保DNA非常干净。当制备载体或切除待插入的片段时，从约2μg的DNA开始。
每次酶促反应后，用旋转柱纯化DNA。在40-45μl的10mM Tris（pH8.5）中洗脱DNA，然后进行下一步反应。（在用凝胶纯化DNA之前不需要使用旋转柱。）
为了最大限度地提高效率，请尽量减少程序中的步骤数。例如，将钝端片段克隆到钝性载体位点（例如SmaI位点）比将其用Klenow或T4 DNA聚合酶钝化的位点更好。
如有疑问，用凝胶纯化DNA。更清洁的起始材料将产生更好的结果。
2、准备矢量
限制性克隆最常见的问题是在手术后恢复起始载体。该问题有两个原因：载体的不完全消化，以及切割载体与其自身的重新连接。下面描述的技巧将最大限度地减少这些影响。
确保载体的消化完成。使用过量的限制酶（约20 U，2μgDNA），消化约4小时。如果载体需要用两种具有不同最佳反应缓冲液的酶切割，则依次进行消化，并在其间进行旋转柱纯化。
消化载体（并且如果合适的话钝化），用磷酸酶处理：在37℃下1小时处于5'突出端，或者如果DNA具有任何平末端或3'突出端则在50℃处理1小时。
用旋转柱除去磷酸酶。通常不需要对载体进行凝胶纯化，因为磷酸酶处理会使产生的任何额外DNA失活。
3、使用载体，确保消化和磷酸酶反应完成。彻底和反复地涡旋混合物，并且不允许任何液滴逃脱酶处理。在涡旋后短暂旋转以确保管侧没有留下液滴是个好主意。
准备插入的片段
为了制备插入的片段，不完全消化不是一个严重的问题，因为片段的部分回收是可接受的。您可以使用相对较短的消化时间，对于双重消化，您可以使用对一种或两种酶来说不是最理想的反应缓冲液。
用凝胶纯化插入的片段。除去除不需要的或不完全消化的DNA外，该方法还可去除酶和小分子。当用透照仪观察DNA条带时，不要使用312nm或更低的短波紫外线，因为DNA会受到严重损害。请改用360-365 nm紫外灯。
如果通过PCR产生插入的片段，则在进行任何限制性消化之前用凝胶或旋转柱纯化。如果您计划将平末端PCR片段（用聚合酶如Pfu产生）克隆到磷酸酶处理的载体中，请确保您的PCR引物含有5'-磷酸。
结扎和转化
使用磷酸酶处理的载体，进行对照连接，其中省略插入的片段。该对照连接应该产生非常少的转化体，因为只有环状DNA分子有效地转化大肠杆菌，并且在不与磷酸化片段连接的情况下不能发生载体的再环化。
如果DNA仅有粘性末端，则在室温下连接约1小时。如果DNA具有任何平端，则在室温下连接约4小时并使用高浓度T4连接酶。
微量制作和诊断摘要
如果您使用插入的片段获得了比用于对照连接的结扎更多的转化体，那么您的克隆几乎肯定会起作用，并且您通常只能制作3-4个小量制备物。
在执行小量制备的诊断限制摘要时，始终包括起始向量作为参考标准。
